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UV1901PC紫外可見分光光度計法測定水楊酸的含量 

一.UV1901PC紫外可見分光光度計簡介

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

二.UV1901PC紫外可見分光光度計法原理

分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對物質(zhì)進行定性或定量分析。

分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

紫外吸收光譜的定性分析為化合物的定性分析提供了信息依據(jù)。由于分子結(jié)構(gòu)不同但只要具有相同的生色團，它們的zui大吸收波長值就相同。因此，通過對末知化合物的掃描光譜、zui大吸收波長值與已知化合物的標準光譜圖在相同溶劑和測量條件下進行比較，就可獲得基礎(chǔ)鑒定。 

1-苯甲酸；2-水楊酸 

水楊酸在波長300 nm處有吸收峰，而苯甲酸此處無吸收，在波長230 nm兩組吸收峰重疊，為了避開其干擾，選用300 nm波長作為測定水楊酸的工作波長。由于乙醇在250～350nm無吸收干擾，因此可用60%乙醇為參比溶液。

三.儀器與試劑 

1．儀器 

UV1901PC紫外可見分光光度計；容量瓶100mL 1個、50mL 5個；刻度吸量管1mL、2mL、5mL各1支 。 2．試劑 

水楊酸對照品（分析純）；60%乙醇溶液（自制）。

 四、實驗步驟 

1、標準溶液的制備：準確稱取0.0500 g水楊酸置于100 mL燒杯中，用60%乙醇溶解后，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，以60%乙醇稀釋至刻度，搖勻。此溶液濃度為0.5mg·mL-1。 

2、將五個50mL容量瓶按1-5依次編號。分別移取水楊酸標準溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL于相應(yīng)編號容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀釋至刻度，搖勻。 

3、用1 cm石英吸收池、，以60%乙醇作為參比溶液，在200～350 nm波長范圍內(nèi)測定一份水楊酸標準溶液的紫外吸收光譜，確定zui大吸收波長。 

4、在選定波長下，以60%乙醇為參比溶液，由低濃度到高濃度測定水楊酸標準溶液系列及未知液的吸光度。以水楊酸標準溶液的吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，根據(jù)水楊酸試液的吸光度，通過標準曲線計算水楊酸試樣中水楊酸的含量。 

五、數(shù)據(jù)處理 

1. 根據(jù)某一濃度下的全波長掃描圖，確定*吸收波長。

 2、繪制標準曲線，計算工作曲線方程及R2值。

 3、計算未知樣中水楊酸的濃度。